Pomagaj Leopoldu

Ljudje imamo sposobnost sinteze proteina C16orf58. Tvoj mrož (Odobenus rosmarus) Leopold ima redko genetsko okvaro, kjer mu primanjkuje tega proteina. Kot Biokemik mu želiš pomagati in se zato lotiš raziskovanja tega proteina v UniProtu.

1. Podaj UniProt kodo človeškega proteina, njegovo velikost in druge ime (kratico).

2. Podaj dolžino celotnega mRNA zaporedje mroževega proteina

3. Ker si študent brez denarja in je oskrba mroža zelo draga, poskusiš sintetizirati protein sam, in sicer v E.Coli. Ugotovili smo, da prvih posttranslacijske modifikacije na prvih 50 ak nimajo bistvenega vpliva na delovanje. Ali je mogoče narediti ekspresijo bakterijskem ekspresijskem sistemu, utemelji? Kolikšna je najkrajša funkcionalna dolžina DNA vključka za plazmidni vektor, vsebovati mora start kodon in heksahistidinsko oznako.

4. Vključek boš vstavil v vektor pUC19 v MCS. Na voljo imaš restriktaze BfaI, CviQI, EcoRI. Katero od teh bi izbral in zakaj? Pomagaj si z orodjem NEBcutter 3.0. Kaj moraš DNA vključku še dodati, da ga boš lahko z izbrano restriktazo sploh vstavil v vektor?

5. Koliko baznih parov je velik nov vektor z vključkom?